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Wissenschaftliche Berichte Band 12, Artikelnummer: 16730 (2022) Diesen Artikel zitieren

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Mehrere aktuelle Studien haben die Wirksamkeit der Photobiomodulationstherapie (PBMT) bei schmerzhaften klinischen Zuständen nachgewiesen. Diabetische Neuropathie (DN) kann mit der Aktivierung von Mitogen-aktivierten Proteinkinasen (MAPK) wie p38 im peripheren Nerv zusammenhängen. Der MAPK-Signalweg wird als Reaktion auf extrazelluläre Reize aktiviert, einschließlich der Interleukine TNF-α und IL-1β. Wir haben das schmerzlindernde Potenzial von PBMT bei Ratten mit Streptozotocin (STZ)-induzierter diabetischer Neuropathie und seinen Einfluss auf die MAPK-Signalwegregulation und die Kalziumdynamik (Ca2+) überprüft. Wir beobachteten dann, dass PBMT, das auf die DRG-Region (Dorsal Ganglion) L4-L5 angewendet wurde, die Intensität der Hyperalgesie verringerte, die TNF-α- und IL-1β-Spiegel senkte und die p38-MAPK-mRNA-Expression im DRG diabetischer neuropathischer Ratten verringerte. DN induzierte die Aktivierung von phosphoryliertem p38 (p-38) MAPK, das zusammen mit TRPV1+-Neuronen lokalisiert war; PBMT verhinderte teilweise die Aktivierung von p-38. DN hing mit einem Anstieg der p38-MAPK-Expression aufgrund proinflammatorischer Interleukine zusammen, und die PBMT-Behandlung (904 nm) wirkte diesem Zustand entgegen. Auch die Sensibilisierung von DRG-Neuronen durch den während der Ca2+-Dynamik gezeigten hyperglykämischen Zustand wurde durch PBMT reduziert, was zu seinen antihyperalgetischen Wirkungen beitrug.

Diabetes kann das periphere Nervensystem (PNS) auf verschiedene Weise schädigen und die diabetische Neuropathie (DN) ist eine der häufigsten Komplikationen bei unbehandeltem Diabetes1. DN ist eine chronische komplexe Erkrankung, die die peripheren Nerven betrifft und eine schmerzhafte Erkrankung der oberen und unteren Gliedmaßen verursacht1,2,3,4 mit einer Inzidenzrate von etwa 70 % der Diabetiker5,6. Der Mechanismus, durch den Hyperglykämie zu einer Schädigung peripherer Nerven führt, ist nicht ganz klar, es ist jedoch bekannt, dass mehrere Stoffwechselwege betroffen sind7. Die Hauptereignisse umfassen den Polyolweg über die Aktivierung der Aldosereduktase (AR)8,9,10,11, die Proteinglykosylierung und die Produktion von fortgeschrittenen Glykationsendprodukten (AGEs)10,12,13. Darüber hinaus tragen die Bildung freier Radikale im Zusammenhang mit oxidativem Stress14,15, die verringerte neurotrophe Unterstützung16,17 und die erhöhte Proteinkinase-C-Aktivierung (PKC)9,18 zur peripheren Schädigung bei. Als Folge des metabolischen Ungleichgewichts kommen Mitochondrienversagen10,19,20 und entzündliche Prozesse ebenfalls häufig vor und stehen im Zusammenhang mit der Phosphorylierung von Mitogen-aktivierten Proteinkinasen (MAPKs)21,22,23,24,25.

MAPK ist eine Familie von Serin/Threonin-Proteinkinasen, die für die Umwandlung extrazellulärer Reize in intrazelluläre posttranslationale und transkriptionelle Reaktionen verantwortlich sind26,27,28. Es umfasst p38-MAPK, extrazelluläre signalregulierte Proteinkinase (ERK1/2) und c-Jun N-terminale Kinase/stressaktivierte Proteinkinase (SAPK/JNK)29. Die drei Hauptunterfamilien von MAPK (p38, ERK1/2 und JNK) koordinieren mehrere Funktionen: Gentranskription, Proteinsynthese, Zellzyklus, Proliferation, Differenzierung und Apoptose30,31,32,33. Extrazelluläre Reize wie proinflammatorische Zytokine34,35,36 und oxidativer Stress30,37 können den MAPK-Signalweg aktivieren, auch unter dem Einfluss der Ca2+-Dynamik38,39. Membrandepolarisation kann den Kalziumeinstrom durch Kalziumkanäle vom L-Typ fördern und MEK1 aktivieren, das MAPK39 phosphoryliert. Hyperglykämie scheint einer der Faktoren zu sein, die die Phosphorylierung der MAPKs stimulieren könnten40,41, sobald die Aktivierung von p38 in peripheren sensorischen Neuronen diabetischer Ratten beobachtet wurde42, insbesondere in den Spinalganglien (DRG)43,44,45,46. In ähnlicher Weise führt die Phosphorylierung von JNK über die Aktivierung von Caspase-322,47,48,49 zur Apoptose von durch Hyperglykämie gestressten Neuronen. Darüber hinaus stimuliert die MAPK-Signalübertragung die transiente Rezeptorpotential-Expression des Vanilloid-Subtyps 1 (TRPV1) bei chronischen Schmerzen, einem hoch Ca2+-durchlässigen Kanal50. Dies führt zu mehreren Diabetes-Komplikationen, einschließlich thermischer Hyperalgesie51.

Aufgrund der Komplexität der bei DN beobachteten Stoffwechselveränderungen gibt es mehrere pharmakologische Angriffspunkte zur Behandlung der schmerzhaften Erkrankung, allerdings mit geringer Wirksamkeit. Die meisten Patienten berichten von einer gewissen Linderung der Symptome, die jedoch im Laufe der Zeit, sogar noch vor Ende der Behandlung, zurückgeht52. Die als nicht-thermischer Prozess charakterisierte Photobiomodulationstherapie (PBMT) umfasst die Aktivierung spezifischer zellulärer Chromophore wie Cytochrom-C-Oxidase (CCO; Mitochondrienkomplex IV) durch rote und infrarote Strahlung53. Dieser Prozess wird durch photophysikalische und photochemische Reaktionen innerhalb der Zellen ausgelöst, wenn das Licht die Zellmembran durchdringt54,55,56 und dadurch die Modulation spezifischer Signalwege im Zusammenhang mit dem Zellüberleben bewirkt, wie z. B. der Anstieg von Adenosintriphosphat (ATP), der Sauerstoffproduktion usw Freisetzung von Stickoxid (NO)57. Infolgedessen kann die Photobiomodulation als Therapie zur Behandlung einiger schmerzhafter Zustände eingesetzt werden58,59,60,61,62,63,64,65 einschließlich DN, zumindest ergänzend, wie in einer früheren Studie unserer Gruppe beobachtet66. Darauf aufbauend zielte diese Studie darauf ab, die antihyperalgetischen Wirkungen von PBMT (904 nm) auf Streptozotocin (STZ)-induzierte diabetische Neuropathie zu analysieren und dabei die Rolle des MAPK-Signalwegs im Krankheitsverlauf und als Ziel für PBMT zu berücksichtigen Mechanismus.

Das T1D-Induktionsprotokoll durch niedrige STZ-Dosen (fünf niedrige Dosen, eine Einzeldosis von 25 mg/kg pro Tag) war für die Entstehung einer irreversiblen Hyperglykämie geeignet. Alle Ratten, denen STZ-Injektionen verabreicht wurden (STZ- und STZ + PBMT-Gruppen), wurden nach fünf niedrigen STZ-Dosen hyperglykämisch (≥ 250 mg/dl Blutzuckerkonzentration; 349,07 ± 48,23 mg/dl) und erreichten zwischen der vierten und vierten Dosis die Schwelle für Hyperglykämie fünfte Tage (Abb. 1A,B). Hyperglykämische Ratten zeigten außerdem Polyurie, Polyphagie und Polydipsie (Daten nicht gezeigt). Sie hörten auf, an Gewicht zuzunehmen, mit einem leichten Gewichtsverlust (in Gramm) während des gesamten Versuchszeitraums (Abb. 1C). Die systemische Verabreichung von Natriumcitratpuffer (SCB), dem STZ-Vehikel, veränderte weder den Blutzuckerspiegel noch die Gewichtszunahme im Vergleich zu kontrollnaiven Ratten.

PBMT verringert die Hyperalgesie von T1D-Ratten, ohne ihren Blutzuckerspiegel oder ihr Gewicht zu verändern. (A) Durchschnittliche Morgenglykämie (rote Linie) von Ratten während des Protokolls der T1D-Induktion durch mehrere niedrige STZ-Dosen; gepunktete horizontale schwarze Linie: etablierter Diabetes-Grenzwert (Glukose ≥ 250 mg/dl). (B) Ratten aus den Gruppen STZ (rote Linie) und STZ + PBMT (grüne Linie) zeigten nach 7, 14, 21, 24 und 28 Tagen ein hohes Maß an Hyperglykämie. (C) Ratten aus den Gruppen STZ (rote Linie) und STZ + PBMT (grüne Linie) hörten nach der Installation von Diabetes auf, an Gewicht zuzunehmen. (D) Daten aus mechanischen Entzugsschwellen (Δ; g; die Intensität der Hyperalgesie) zeigen, dass PBMT die Intensität der Hyperalgesie der STZ + PBMT-Gruppe (grüne Linie) im Vergleich zur STZ-Gruppe (rote Linie) signifikant reduzierte 24. und 28. Tag. (E) Balkendiagramm, das die antihyperalgetische Wirkung von PBMT im Zeitraum zwischen dem 21. und 28. Tag hervorhebt. In (A–C) bedeutet das Symbol (***) einen signifikanten Unterschied (p < 0,001) zwischen Diabetikergruppen und Kontrollen (Zwei-Wege-ANOVA gefolgt von Bonferroni-Post-hoc-Test). In (D) und (E) bedeuten die Symbole (**) und (***) einen signifikanten Unterschied (p < 0,01 bzw. p < 0,001) zwischen STZ- und STZ + PBMT-Gruppen (Zwei-Wege-ANOVA, gefolgt von Bonferroni posthoc). prüfen); Symbol (#) bedeutet signifikanten Unterschied (p < 0,001) zwischen STZ-induzierten Gruppen im Vergleich zu Kontrollgruppen (Zwei-Wege-ANOVA gefolgt von Bonferroni-Post-hoc-Test [D]; Einweg-ANOVA gefolgt von Bonferroni-Post-hoc-Test [E]). Die Daten werden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt; Vertikale gepunktete schwarze Linien zeigen die PBMT-Periode an.

STZ ist ein diabetogenes Antibiotikum, das für seine selektive Fähigkeit zur Abtötung der Betazellen (β-Zellen) der Bauchspeicheldrüse bekannt ist und häufig für das T1D-Modell bei Ratten verwendet wird67,68,69,70. STZ wird vom Glukosetransporter GLUT2 der β-Zellen aufgenommen und löst Immunmechanismen aus68,69. Laut Wang und Gleichmann68,69 schränkt STZ die GLUT2-Expression in vivo und in vitro ein, wenn es über mehrere Niedrigdosierungsprotokolle verabreicht wird. Dabei handelt es sich um eine Methode, die darauf abzielt, weniger STZ-Nebenwirkungen wie Neurotoxizität hervorzurufen. Im Allgemeinen zeigen Ratten, denen STZ-Injektionen verabreicht wurden, Defizite in der Insulinproduktion, die zu Hyperglykämie und in der Folge zu Polydipsie und Polyurie führen70. Alle diese Diabetes-Signale wurden bei Ratten beobachtet, die dem STZ-Protokoll mit niedrigen Dosen unterzogen wurden (STZ- und STZ + PBMT-Gruppen), was ein reproduzierbares Modell der Diabetes-Induktion darstellt, wie in früheren Studien unserer Gruppe gezeigt66,71,72,73,74 .

Diabetische Ratten, die einer PBMT unterzogen wurden oder nicht (STZ + PBMT bzw. STZ-Gruppen), zeigten an den Tagen 21, 24 und 28 des Versuchsprotokolls ähnliche Hyperglykämiewerte (454,94 ± 37,10 mg/dl). Das Gleiche wurde beim Gewicht der Ratten beobachtet, da dieser Parameter nur vom diabetischen Zustand und nicht vom PBMT abhing. Ebenso hatte PBMT keinen Einfluss auf gesunde Ratten (Kontrolle, nicht-diabetisch und nicht-hyperalgetisch; SCB + PBMT-Gruppe), wie in Abb. 1B, C gezeigt. Unsere Ergebnisse stimmen mit der von Peplow und Kollegen75 durchgeführten Studie überein, in der PBMT (660 nm; 100 mW; 4,7–6,3 J/cm2; 20 s) zur Wundheilung bei Diabetikern angewendet wird und weder die Hyperglykämie noch den Stoffwechselstatus des Patienten verändert .

Die Daten reproduzierten frühere Ergebnisse unserer Forschungsgruppe66. Am 21. Tag (nach der ersten PBMT-Sitzung) gab es keine Verringerung der Intensität der mechanischen Hyperalgesie (Δ Entzugsschwelle, g). Am 24. und 28. Tag wurde jedoch eine zeitlich signifikante Verringerung (p < 0,01 bzw. p < 0,001) der Intensität der Hyperalgesie in der STZ + PBMT-Gruppe im Vergleich zur STZ-Gruppe beobachtet. Dennoch kam es bei der Anwendung von PBMT auf Kontrollratten (SCB + PBMT-Gruppe) zu keiner Änderung der mechanischen Entzugsschwellen unter ähnlichen Bedingungen, die bei SCB- (Vehikel-) und naiven Gruppen beobachtet wurden, wie in Abb. 1D, E (die neueste) gezeigt im Detail für den PBMT-Zeitraum).

PBMT wird seit langem zur klinischen Behandlung neuropathischer Schmerzen mit zufriedenstellenden Ergebnissen eingesetzt76,77, seine analgetischen Mechanismen sind jedoch nicht vollständig geklärt. Die Hemmung der neuronalen Hyperaktivität durch Infrarotlicht scheint eine der Möglichkeiten zu sein, wie PBMT direkt auf die Neuronen78,79 und folglich auf die Schmerzfolgen wirkt. Es wurde ein Neuromodulationseffekt vermutet, da Patienten mit Rückenschmerzen, die einer PBMT (808 nm; 100 mW; 8,4 J; 84 s; eine einzelne Sitzung) auf L4-L5-Ebene unterzogen wurden, eine signifikante Schmerzlinderung zeigten52,80. Dieser modulierende Effekt könnte der Schlüssel zur Regulierung der neuronalen Aktivität sein, die durch Hyperglykämie beeinträchtigt wird, und so schmerzhafte Empfindungen vermeiden.

Unsere Analyse basierte auf einer früheren Studie, in der dynamische motorische Funktionsänderungen im Zusammenhang mit STZ-induziertem DN74 identifiziert wurden. Wie in Abb. 2A,B gezeigt, konnte PBMT die maximale Kontaktfläche (cm2) und die Druckfläche (cm2) der Hinterpfoten der Ratten nach 4 (24. Tag) und 8 (28. Tag) PBMT-Sitzungen verbessern. Wahrscheinlich deuten diese Daten darauf hin, dass eine Verbesserung der Analgesie die Nervenleitung verbessern sollte. In solchen Zeiträumen wurden statistische Unterschiede zwischen STZ + PBMT- und STZ-Gruppen beobachtet. Für den Parameter „Schrittlänge (cm)“ (Abb. 2C) wurde jedoch kein Unterschied beobachtet, außer zwischen beiden neuropathischen Gruppen (STZ und STZ + PBMT) und den Kontrollgruppen (Naiv, SCB und SCB + PBMT). Bereiche der Finger und der Plantarpolster (kahl) erschienen in den Fußabdrücken der rechten Hinterpfote (RH) von Ratten der STZ + PBMT-Gruppe am 24. und 28. Tag (Abb. 2D: e) gut abgegrenzt und ähnelten denen beobachtet in Naiv- und SCB-Gruppen (Abb. 2D: a, b, d) und unterscheidet sich daher von der STZ-Gruppe (Abb. 2D: c). Zuletzt zeigte sich am 28. Tag eine Verringerung der Kontaktfläche bei geringer Auflösung der Fußabdrücke.

Die räumlichen Gangparameter wurden im DN verändert und durch PBMT vereitelt. (A) Maximale Kontaktfläche (cm2). (B) Druckbereich (cm2). (C) Schrittlänge (cm). Die Daten werden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt; Symbole (*) und (***) bedeuten einen signifikanten Unterschied (p < 0,05 bzw. p < 0,001) zwischen STZ- und STZ + PBMT-Gruppen; Symbol (#) bedeutet signifikanten Unterschied (p < 0,001) zwischen STZ-induzierten Gruppen (STZ und STZ + PBMT) im Vergleich zu Kontrollgruppen (Naiv; SCB; SCB + PBMT); Zweifaktorielle ANOVA, gefolgt von einem Bonferroni-Post-hoc-Test. (D) Das allgemeine Muster der 2D-Fußabdrücke der Hinterpfote; Ratten aus der STZ-Gruppe (c) zeigten eine Verringerung der Kontaktfläche, abgegrenzt durch die weiße gepunktete Linie und angezeigt durch die roten Pfeile; Ratten aus der STZ + PBMT-Gruppe (e) zeigten einen Fußabdruckbereich, der den Kontrollgruppen am nächsten lag (rote Pfeile). Im unteren rechten Rahmen (f) dient die Körperachse als Referenz, um die Positionierung der Pfote während der Analyse zu beobachten.

Laut Zochodne et al.81 führt unkontrollierter Diabetes zu einer Schädigung sensorischer Neuronen vor der Beteiligung motorischer Neuronen. DN ist mit Haltungsänderungen in diesem Prozess verbunden, einschließlich einer Änderung der Fußpositionierung während des Gangs82 und Änderungen des während der gesamten Standphase ausgeübten Drucks83,84. Unsere Gruppe zeigte, dass die maximale Intensität (au) der wichtigste veränderte Parameter am 14. Tag nach Beginn der STZ-Injektionen war74, was mit früheren Ergebnissen anderer Gruppen übereinstimmt84. Diabetische Tiere, deren mechanische Schwelle am 14. Tag abnahm, übten beim Kontakt der Pfoten mit dem Glasboden des CatWalk XT-Systems weniger Druck aus. Diese Ergebnisse folgen dem Muster sensorischer Veränderungen des DN, auch bekannt als „Strumpf-und-Handschuh“, das als sensorische Störung der Extremitäten von Gliedmaßen auftritt und die Funktionalität beeinträchtigt2,85.

Nur wenige Studien untersuchten den Einfluss von PBMT auf motorische Parameter in Tiermodellen, vor allem bei Verwendung des CatWalk XT-Systems. Durch Schlangengift verursachte lokale Myonekrose führt 3 Stunden nach der Giftinjektion zu einer halbgebeugten Haltung der betroffenen Hinterbeine. PBMT, das im gleichen Zeitraum mit dem GaAs-Laser (904 nm; 4 J/cm2) angewendet wurde, bringt jedoch die maximale Intensität (ua), Stand (s) und Balance (s) auf Werte zurück, die denen der Kontrolle60 ähneln. Obwohl hyperglykämische Ratten keine Halbflexion der Hinterbeine zeigten, übten sie beim Gang weniger Druck aus (dargestellt durch geringere Intensität und kleinere Pfotenkontaktfläche). Daher könnte PBMT den veränderten Gang hyperglykämischer Ratten als Folge einer durch diese Therapie geförderten antihyperalgetischen Wirkung zumindest teilweise normalisieren. Insgesamt ist es plausibel, anzunehmen, dass durch Diabetes verursachte neuropathische Schmerzen wahrscheinlich auf eine Beeinträchtigung sensorischer und motorischer Neuronen zurückzuführen sind.

Um weiter zu untersuchen, ob die antihyperalgetische Wirkung von PBMT mit der Reduzierung von Zytokinen in DRG verbunden sein könnte, analysierten wir die Konzentrationen von TNF-α, IL-1β, IL-6, CINC-1 und IL-10 mittels ELISA-Immunoassay. Wie in Abb. 3B, E gezeigt, erhöhte die Hyperglykämie den Spiegel von IL-1β bzw. IL-10, während sie keinen Einfluss auf TNF-α, IL-6 und CINC-1 hatte (Bilder A, C und D, jeweils). Allerdings verringerte die PBMT alle analysierten Zytokine unabhängig von der Hyperglykämie (Abb. 3). In Übereinstimmung mit unseren Erkenntnissen erhöht Hyperglykämie insbesondere den Spiegel des entzündungsfördernden Zytokins IL-1 β und des entzündungshemmenden Zytokins IL-10 in DRG10. Auch die Spiegel von TNF-α, IL-6 und CINC-1 wurden durch die Hyperglykämie nicht beeinflusst, was auf einen reinen entzündlichen Hintergrund in DN schließen lässt. Dennoch wurden in dieser Studie andere Entzündungsparameter, wie beispielsweise die Migration polymorphkerniger Zellen, nicht analysiert. Daten aus dieser Studie zeigten jedoch, dass PBMT den Zytokinspiegel im DRG senkte, einschließlich der durch Hyperglykämie erhöhten Zytokine.

Auswirkungen von PBMT auf die DRG-Spiegel von TNF-α, IL-1β, IL-6, CINC-1 und IL-10. (A) Es gab keinen Anstieg der TNF-α-Spiegel (pg/ml) in der STZ-Gruppe (rote Symbole); Die STZ + PBMT-Gruppe (grüne Symbole) zeigte im Vergleich zu allen anderen Gruppen eine signifikante Verringerung der TNF-α-Spiegel (pg/ml). (B) Bei den IL-1β-Spiegeln (pg/ml) gab es in der STZ-Gruppe (rote Symbole) im Vergleich zu allen anderen Gruppen einen signifikanten Anstieg. (C) Die IL-6-Spiegel (pg/ml) waren in den Gruppen SCB + PBMT (blaue Symbole) und STZ + PBMT (grüne Symbole) im Vergleich zu allen anderen Gruppen signifikant reduziert. (D) Die CINC-1-Konzentrationen (pg/ml) zeigten nur in der SCB + PBMT-Gruppe (blaue Symbole) eine signifikante Verringerung. (E) Der IL-10-Spiegel (pg/ml/mg) zeigte in der STZ-Gruppe (rote Symbole) im Vergleich zu allen anderen Gruppen einen signifikanten Anstieg. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt; Symbole (*) und (**) bedeuten p < 0,05 bzw. p < 0,01; Symbol (#) bedeutet, dass sich alle Kontrollgruppen signifikant von der STZ-Gruppe unterscheiden (p < 0,05); Einfaktorielle ANOVA, gefolgt von einem Bonferroni-Post-hoc-Test.

Obwohl die Pathophysiologie neuropathischer Schmerzen von der jeweiligen Art der Neuropathie abhängt, ist die Verwendung von PBMT (660 nm; 30 mW; 9 J/cm2; 60 s; 7 aufeinanderfolgende Tage; 63 J/cm2 kumulative Energiedichte) bei durch den Ischiasnerv induzierter Hyperalgesie sinnvoll Das Konstriktionsmodell führt zu einer Verringerung der proinflammatorischen Zytokine wie TNF-α, IL-1β und HIF-1α (Hypoxie-induzierbarer Faktor 1α)86. In ähnlicher Weise wurde eine Verringerung der TNF-α-Spiegel durch PBMT (950 nm; 2,5 J/cm2; 32 s; 15 aufeinanderfolgende Tage; 37,5 J/cm2 kumulative Energiedichte) im Mäusemodell einer Ischiasnervquetschungsverletzung beschrieben87. Diese Beweise deuten auf die entzündungshemmende Wirkung von PBMT hin. In diesem Zusammenhang wurden die durch PBMT geförderten entzündungshemmenden Wirkungen zuvor in einem Carrageen-induzierten Entzündungsmodell beobachtet, bei dem sowohl 660-nm- als auch 684-nm-Low-Level-Laser (30 mW; 7,5 J/cm2; 196 s; ein einzelner Punkt) verwendet wurden ) reduzierte die Ödembildung und die Migration entzündlicher Zellen 4 Stunden nach der Carrageenan-Injektion88.

Entzündliche Zytokine können verschiedene Zellmembranrezeptoren aktivieren und so Umweltsignale übertragen. In mehreren Zelllinien werden durch die Aktivierung von G-Protein-gekoppelten Rezeptoren (GPCRs) und Rezeptortyrosinkinasen (RTKs) MAPKs aktiviert89. MAPK-Kaskaden-Signalwege sind evolutionär konservierte Wege, die mit der intrazellulären Signaltransduktion als Reaktion auf verschiedene extrazelluläre Reize zusammenhängen90. MAPK steuert viele zelluläre Prozesse wie Wachstum, Proliferation, Differenzierung, Motilität, Stressreaktion, Überleben und Apoptose91. Alle drei Gruppen von MAPK (p38; ERK1/2; JNK) können durch osmotische Störungen aktiviert werden, die von Glukose, Polyolweg, oxidativem Stress und fortgeschrittenen Glykationsendprodukten (AGE) herrühren92. Diese Ereignisse sind maßgeblich an der Ätiologie von DN1 beteiligt.

Um eine mögliche Wechselwirkung zwischen der Entzündung und dem MAPK-Signalweg zu untersuchen, haben wir die MAPK-Gen- und Proteinexpression im L4-L5-DRG weiter untersucht, sobald angenommen wird, dass diese molekularen Ziele aufgrund einer durch den unkontrollierten Diabetes verursachten Erkrankung im DN verändert werden92. Vor den quantitativen Echtzeit-PCR-Experimenten wurden Primer für Ziel- (p38, ERK1/2 und JNK) und Housekeeping-Gene (endogene Kontrollen: Arfgef1 und Serpinb6) anhand der Standardkurvenkonstruktion auf ihre Wirksamkeit getestet. Dies erfolgte durch serielle Verdünnungen naiver cDNA (1:4; 1:8; 1:16; 1:32; 1:64) und einer festen Primerkonzentration (100 nM). Für alle getesteten Primer, einschließlich der endogenen Kontrollen, wurde eine hohe Effizienz beobachtet (99,9; r2 0,98) (Daten nicht gezeigt). Anschließend wurde die Expression der Zielgene durch die Mittelwerte von Ct (Zyklusschwelle) aus einem Pool der Arfgef1- und Serpinb6-Genexpression normalisiert.

In dieser Studie beobachteten wir einen signifikanten Anstieg der Expression von p38-mRNA in der STZ-Gruppe im Vergleich zu den Gruppen Naiv, SCB (Vehikel) (p < 0,01) und SCB + PBMT (p < 0,001; ungepaarter Student-T-Test). Darüber hinaus war die p38-mRNA-Expression in der STZ-Gruppe im Vergleich zur STZ + PBMT-Gruppe signifikant höher (p < 0,05; ungepaarter Student-t-Test), wie in Abb. 4A gezeigt. Sobald PBMT den Blutzuckerspiegel nicht verändert, schließen wir, dass dieser Effekt mit Hyperalgesie verbunden ist, die nur in der STZ-Gruppe auftritt. Es wurden keine Unterschiede in der p38-mRNA zwischen den Gruppen STZ + PBMT, SCB und Naiv beobachtet. Leichte Unterschiede zwischen den Gruppen hinsichtlich der ERK1/2- und JNK-mRNA-Expression waren nicht signifikant (Abb. 4B, C).

Quantitative Expression von MAPK-mRNA. Die Genexpressionswerte von p38 (A), ERK1/2 (B) und JNK (C) wurden durch einen Pool endogener Kontrollexpressionen (Arfgef1 und Serpinb6) indexnormalisiert. PBMT verringerte die p38-mRNA-Expression bei hyperalgetischen Ratten (STZ + PBMT-Gruppe). Hyperglykämie erhöhte die mRNA-Expression von p38, nicht jedoch ERK1/2 und JNK in DRG, die mit Hyperalgesie assoziiert waren. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt; Symbole (*), (**) und (***) bedeuten p < 0,05, p < 0,01 bzw. p < 0,001 in den Vergleichen zwischen STZ (rote Symbole) und den anderen Gruppen (naiv, schwarze Symbole). ; SCB, graue Symbole; SCB + PBMT, blaue Symbole; STZ + PBMT, grüne Symbole); ungepaarter Student-T-Test.

Die Immunfluoreszenz (IF)-Experimente ergaben auch einen höheren Anstieg der Expression von aktiviertem MAPK, insbesondere p-p38, in der STZ-Gruppe (Abb. 5H, I). Die Fluoreszenz bezüglich der p-38-Phosphorylierung bei hyperalgetischen Ratten wurde durch die Anwendung von PBMT in der DRG-Region reduziert, wie in der STZ + PBMT-Gruppe gezeigt, in der es einen Teil der p-38-Aktivierung gab, jedoch in einer geringeren Anzahl von Neuronen Vergleich mit der STZ-Gruppe (Abb. 5K, L). Sowohl für die STZ- als auch für die STZ + PBMT-Gruppe war die Aktivierung von p38 stark in den Kernen der DRG-afferenten Neuronen konzentriert, wie durch DAPI-Co-Färbung gezeigt wurde (Abb. 5I, L im Detail). Neben der geringeren Anzahl p-p38-positiver Neuronen in der STZ + PBMT-Gruppe konnte auch eine höhere Intensität der im Zytoplasma der Neuronen gestreuten Fluoreszenz mit einigen vesikelartigen Konformationen beobachtet werden (Abb. 5K, L im Detail). Die Bedeutung dieses Unterschieds im Vergleich zu hyperalgetischen Nicht-PBMT-Ratten (STZ-Gruppe) ist jedoch unklar.

Histologische DRG-Aufnahmen von p-p38 MAPK mittels konfokaler Mikroskopie. DRG-Querschnitte mit einer Dicke von 14 µm wurden dem IF-Protokoll zur Färbung der endogenen p38-Phosphorylierung in Thr180 und Tyr182 (B, E, H, K) unterzogen. DAPI für die Kernfärbung ist in (A,D,G,J) dargestellt. Zusammengeführte (DAPI + p-p38) Bilder werden auch in (C,F,I,L) angezeigt. In (H) und (K) zeigen weiße Pfeile auf die vergrößerten Bereiche. Details werden in der linken Ecke von (H,I,K,L) angezeigt. Vergrößerung: ×40; Maßstabsbalken: 50 µm.

Ähnlich wie bei den Genexpressionsergebnissen wurde eine geringe Phosphorylierung des ERK1/2-Proteins festgestellt. Allerdings waren sowohl für die SCB + PBMT- als auch für die STZ + PBMT-Gruppe (Abb. 6E, K) die Ausmaße der fluoreszenzbedingten p-ERK1/2-Aktivierung im Vergleich zu den SCB- und STZ-Gruppen sogar noch niedriger (Abb. 6B, H). , jeweils). Eine interessante Beobachtung in Bezug auf die STZ + PBMT-Gruppe ist das Vorhandensein von p-ERK1/2, das sich in der Nähe der Plasmamembran ansammelt, wie in Abb. 6K,L (im Detail) dargestellt.

Histologische DRG-Mikroaufnahmen von p-ERK1/2 MAPK mittels konfokaler Mikroskopie. 14 µm dicke DRG-Querschnitte, die dem IF-Protokoll zur Färbung der ERK1/2-Phosphorylierung in Thr202 und Tyr204 (p44/p42) (B, E, H, K) vorgelegt wurden. DAPI für die Kernfärbung ist in (A,D,G,J) dargestellt. Bilder der Zusammenführung (DAPI + p-ERK1/2) werden auch in (C,F,I,L) gezeigt. In (H) und (K) zeigen weiße Pfeile auf die vergrößerten Bereiche. Details werden in der linken Ecke von (H,I,K,L) angezeigt. Vergrößerung: ×40; Maßstabsbalken: 50 µm.

Im Einklang mit der ERK1/2-Phosphorylierung verringert die Anwendung von PBMT in der DRG-Region die p-JNK-Expression unabhängig von Hyperalgesie (SCB + PBMT- und STZ + PBMT-Gruppen; Abb. 7E bzw. K). Ratten, die sich keiner PBMT unterzogen, zeigten eine basale Expression von p-JNK, die diffus im Zytoplasma beobachtet wurde (SCB- und STZ-Gruppen; Abb. 7B bzw. H).

Histologische DRG-Mikroaufnahmen von p-JNK MAPK mittels konfokaler Mikroskopie. DRG-Querschnitte hatten eine Dicke von 14 µm und wurden dem IF-Protokoll zur Färbung der endogenen p-JNK-Phosphorylierung in Thr183 und Tyr185 (p46/p54) (B, E, H, K) unterzogen. DAPI für die Kernfärbung ist in (A,D,G,J) dargestellt. Zusammengeführte Bilder (DAPI + p-JNK) wurden auch in (C, F, I, L) gezeigt. In (B) und (H) zeigen Pfeile auf eine diffuse Färbung im Zytoplasma. Vergrößerung: ×40; Maßstabsbalken: 50 µm.

Es wurde gezeigt, dass die MAPK-Aktivierung bei verschiedenen Krankheitszuständen mit Allodynie und Hyperalgesie verbunden ist93,94,95. Das am besten untersuchte Mitglied der MAPK-Familie, p38-MAPK, wird typischerweise durch extrazellulären Stress und proinflammatorische Zytokine aktiviert und spielt eine herausragende Rolle im Entzündungsprozess, sobald es nach der systemischen Verabreichung des pharmakologischen p38-Inhibitors zu einer signifikanten Verringerung der Entzündung kommt96. Ratten zeigten 8–12 Wochen nach der STZ-Behandlung eine Aktivierung von p38, JNK und ERK1/2 im L4-L5-DRG, allerdings mit verzögerter Aktivierung von JNK im Vergleich zu p38 und ERK1/241. Es wurde vermutet, dass TNF-α und IL-1β eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung und Aufrechterhaltung von Schmerzzuständen nach einer Verletzung peripherer Nerven spielen97. Sobald p38 die TNF-α- und IL-1β-Biosynthese in DRG reguliert, können beide Reduktionen in entzündungshemmenden Wirkungen mit einem positiven Reflex bei der Analgesie gipfeln97. Daher zeigten unsere Daten, dass PBMT, ein photophysikalischer und photochemischer Effektor von Zellereignissen, eine Verringerung von TNF-α und IL-1β fördert, verbunden mit einer geringeren Aktivierung (Phosphorylierung) von p38, was zur Erklärung der analgetischen Wirkung der Therapie beitragen kann.

Obwohl unsere Daten eine sogar geringfügige Abnahme der MAPK-Aktivierung durch PBMT zeigten, zeigte die in Gewebekulturen von Skelettmuskelzellen untersuchte Lasertherapie (He-Ne; 632,8 nm; 4,5 mW; 3 s jeweils 1,8 mm × 1,8 mm im Quadrat) eine Anstieg von ERK1/2 und keine Auswirkung auf die p38- und JNK-Expression98. Auch die Laserbestrahlung (Er: YAG; 2,94 µm; Fluenz zwischen 0,7 und 17,2 J/cm2) in Osteoblasten-Zellkulturen zeigte eine Aktivierung von ERK1/2 und keine Auswirkung auf die p38- und JNK-Expression99. Daher kann die Wirkung von PBMT auf die Expression von MAPKs von dem an dieser Therapie beteiligten Gewebe abhängen.

Es wurde vermutet, dass die p38-Aktivierung im DRG durch den retrograden Transport der Freisetzung des Nervenwachstumsfaktors (NGF) aus peripherem Gewebe, beispielsweise bei einer Entzündung, ausgelöst wird. Es erhöht die Translation und den Transport von TRPV1 (einem polymodalen Rezeptorkanal) zum peripheren Nozizeptorterminal und trägt so zur Aufrechterhaltung der Hitzeschmerzempfindlichkeit bei. Darüber hinaus wurde p-p38 hauptsächlich in kleinen Neuronen des DRG gefunden, was auf eine höhere Aktivierung in sensorischen Fasern vom Typ C schließen lässt100.

Ergänzend zur IF-Färbung von p-p38 in DRG wurde weiter analysiert, ob seine Expression an einem bestimmten Typ von Nervenfasern beteiligt war, nämlich Typ-C-Fasern (kleine DRG-Neuronen; unmyelinisiert; TRPV1+). TRPV1+-Fasern wurden in DRG-Schnitten aller Versuchsgruppen nachgewiesen. Sie wurden als Typ C klassifiziert, mit höherer Fluoreszenzintensität und höherem Vorkommen in den STZ- und STZ + PBMT-Gruppen (Abb. 8K, O). Die gleichzeitige Färbung von p-p38- und TRPV1+-Fasern war weit verbreitet (Abb. 8L bzw. P), mit einer Prävalenz des TRPV1+-Signals (rot) gegenüber p-p38 (grün) in der STZ + PBMT-Gruppe, wie in gezeigt Abb. 8P (im Detail).

Histologische DRG-Mikroaufnahmen von p-p38 MAPK und der Co-Färbung von TRPV1 durch konfokale Mikroskopie. DRG-Querschnitte wurden in einer Dicke von 14 µm angefertigt und dem IF-Protokoll zur Färbung der endogenen p38-Phosphorylierung in Thr180 und Tyr182 (B,F,J,N) und TRPV1 (C,G,K,O) unterzogen. DAPI für die Kernfärbung ist in (A,E,I,M) dargestellt. Zusammengeführte Bilder (DAPI + p-p38 + TRPV1) werden auch in (D,H,L,P) angezeigt. Die STZ + PBMT-Gruppe zeigte eine mäßige Färbung für p-p38 MAPK (N; weiße Pfeile) und eine erhöhte Färbung für TRPV1 (O; weiße Pfeile). Details werden in der linken Ecke von (L) und (P) angezeigt. Vergrößerung: ×40; Maßstabsbalken: 50 µm.

Es besteht eine Korrelation zwischen TRPV1 und MAPK, da der Ca2+-Eintritt durch TRPV1 zur ATP-Freisetzung, zur Aktivierung des purinergen P2Y2-Rezeptors und zur Transaktivierung des epidermalen Wachstumsfaktorrezeptors (EGFR) führt. Es wurde beschrieben, dass der Anstieg von [Ca2+]i und die Bindung von ATP an P2Y2 das intrazelluläre IP3 über Phospholipase C (PLC) hochregulieren. Die Hochregulierung von IP3 führt zur Öffnung von speichergesteuerten Kanälen (SOC), was zur Freisetzung von Ca2+ aus dem endoplasmatischen Retikulum (ER) führt. Die vorherige TRPV1-vermittelte EGFR-Transaktivierung führt zu einer Ras/Raf/MAPK-Signalisierung101.

Das Hautgewebe wird durch nozizeptive TRPV1+-Nervenendigungen innerviert102, ist leicht dem Sonnenlicht ausgesetzt und wird durch ultraviolettes (UV) Licht aktiviert. UV-Licht aktiviert den Ca2+-Einstrom und den nicht-selektiven kationischen Strom in immortalisierten menschlichen Keratinozyten (HaCaT-Zellen)103. Diese Aktivierung wurde durch Capsazepin, einen TRPV1-Antagonisten, unterdrückt, was eine Wechselwirkung zwischen den Licht- und TRPV1-Kanälen zeigt103. In diesem Sinne zeigten Wang et al.104, dass PBMT durch ein 980-nm-Lasergerät (3 J/cm2; kontinuierliche Welle) einen thermischen Effekt und folglich eine TRPV1-Aktivierung in aus Fettgewebe stammenden Stammzellen induzierte. Unsere Daten von DRG legen nahe, dass PBMT die Expression von TRPV1 bei diabetischen hyperalgetischen Ratten erhöht, obwohl PBMT, wie unten beschrieben, den Ca2+-Einstrom in der DRG-Neuronenkultur verringerte. Es sollten jedoch weitere Studien durchgeführt werden, um die Beteiligung von TRPV1 an der antihyperalgetischen Wirkung von PBMT, das in der DRG-Region hyperglykämischer Ratten angewendet wird, besser zu untersuchen.

Die Aktivierung des MAPK-Signalwegs und seine Modulation durch PBMT scheint mit der Ca2+-Dynamik in den DRG-Neuronen zusammenzuhängen. Der Anstieg der Fluoreszenzintensität von FLUO-4 AM-gefärbten DRG-Neuronen wurde nach den Stimuli mit 15 mM KCl und insbesondere 50 mM KCl für alle Gruppen beobachtet (Abb. 9A). Bemerkenswerterweise wurde die erhöhte Fluoreszenz in Bezug auf Δ[Ca2+]i nach einem 15 mM KCl-Stimulus hauptsächlich in Neuronen beobachtet, die zuvor im hyperglykämischen Medium gehalten wurden (Gruppe mit hohem Glucosegehalt) (Abb. 9B, C). Im Gegensatz dazu zeigten DRG-Neuronen, die in einem hyperglykämischen Medium (55 mM Glucose) gehalten und PBMT ausgesetzt wurden (Gruppe mit hohem Glucosegehalt + PBMT), eine signifikante (p < 0,001) Abnahme der Fluoreszenzintensität während des 15 mM KCl-Stimulus im Vergleich zum High-Glucose-Stimulus. Glukosegruppe (Abb. 9B,C). Während des 50 mM KCl-Stimulus, der als Kontrolle für den Stimulus des Ca2+-Einstroms in reagierenden Neuronen verwendet wurde, wurde der Hauptunterschied (p < 0,05) zwischen der Fluoreszenzintensität der Low-Glucose-Gruppe im Vergleich zur Low-Glucose+-Gruppe beobachtet PBMT-Gruppe (Abb. 9D,E). Als der 50 mM KCl-Stimulus aufhörte, nahm die Fluoreszenzintensität in beiden hyperglykämischen Gruppen ab, kehrte jedoch nicht auf das Grundniveau zurück (Abb. 9D, E).

PBMT verringert die durch Hyperglykämie erhöhte Kalziumdynamik von DRG-Neuronen. Die Fluoreszenzintensität (ΔF = F − F0/F0) wurde in DRG-Neuronen analysiert, die 24 Stunden lang in Medien mit niedrigem (schwarze Linie) oder hohem Glucosegehalt (rote Linie) kultiviert und unmittelbar vor dem Test PBMT (grüne und blaue Linien) ausgesetzt wurden . (A) Allgemeine Darstellung der Fluoreszenzintensitäten (ΔF = F − F0/F0) nach extrazellulären Reizen mit 5 mM (basal), 15 mM (intermediär) und 50 mM (hoch) KCl; ↑[K+]e wurde verwendet, um einen Ca2+-Einstrom in DRG-Neuronen zu erzeugen, die mit FLUO-4 AM inkubiert wurden. (B) Während des Zwischenstimulus (15 mM KCl) gab es einen signifikanten Unterschied im ΔF beim Vergleich der Gruppen mit hohem Glukosegehalt und hohem Glukosegehalt + PBMT (der Vergleich erfolgte unter Berücksichtigung des ΔF, das durch die horizontalen gepunkteten Linien begrenzt ist); Zweifaktorielle ANOVA, gefolgt von einem Bonferroni-Post-hoc-Test. (C) Snap-erworbene Bilder der DRG-Zellkultur während des Zeitraffers, direkt nach dem Stimulus mit 15 mM KCl. (D) Beim hohen Stimulus (50 mM KCl) gab es einen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen mit niedrigem Glukosegehalt und niedrigem Glukosespiegel + PBMT. (E) Snap-erworbene Bilder der DRG-Zellkultur während des Zeitraffers, direkt nach dem Stimulus mit 50 mM KCl. (F) Prozentsatz (%) der reagierenden Zellen während des 15 mM-Stimulus; In der Gruppe mit hohem Glukosegehalt reagierten etwa 60 % aller reagierenden Zellen, d Gruppen. Die Daten werden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt; Symbole (*) und (***) bedeuten p < 0,05 bzw. p < 0,001 im Vergleich zur Gruppe mit hohem Glukosespiegel; Einfaktorielle ANOVA, gefolgt von einem Bonferroni-Post-hoc-Test.

Über die Fluoreszenzintensität (Δ[Ca2+]i) hinaus haben wir auch den Prozentsatz (%) der auf 15 mM KCl reagierenden Zellen an der Gesamtzahl der Neuronen, die auf 50 mM KCl reagieren, quantifiziert (Abb. 9F). Der Prozentsatz der Neuronen, die auf den 15 mM KCl-Stimulus reagierten, war in der Gruppe mit hohem Glukosespiegel höher als in der Gruppe mit niedrigem Glukosespiegel (p < 0,001) und der Gruppe mit hohem Glukosespiegel + PBMT (p < 0,05). Diese Daten legen nahe, dass PBMT die durch Hyperglykämie erhöhte Reaktionsfähigkeit der DRG-Neuronen verringert. Daher ist die Hypothese plausibel, dass einer der möglichen analgetischen Mechanismen von PBMT in der DRG-Region gleichzeitig die Erhöhung der TRPV1-Expression in DRG-Neuronen über IL-1β-induziertes p38 MAPK und die Desensibilisierung der TRPV1+-Neuronen durch Verringerung von Ca2+ ist Zustrom.

PBMT könnte einen neuartigen therapeutischen Ansatz zur Behandlung der diabetischen neuropathischen Hyperalgesie darstellen, der auf seinen vorteilhaften photophysikalischen und photochemischen Wirkungen gegen die funktionellen, molekularen und zellulären Veränderungen basiert, die bei solchen Erkrankungen beobachtet werden und durch den MAPK-Signalweg und die Kalziumdynamik gesteuert werden.

Alle Experimente wurden vom institutionellen Komitee für Ethik bei der Tiernutzung (CEUA/UNICAMP, Genehmigungsnummer 5337-1/2019) genehmigt und folgten den ARRIVE-Richtlinien. Die Experimente wurden auch gemäß den Richtlinien des Brasilianischen Nationalen Rats für Tierversuchskontrolle (CONCEA) und des Brasilianischen Colleges für Tierversuche (COBEA) durchgeführt. Verwendet wurden männliche Lewis-Ratten (LEW/HsdUnib, Harlan, USA, 1996), 4–8 Wochen alt, mit einem Gewicht von 200–250 g, bereitgestellt vom Multidisciplinary Center for Biological Research (CEMIB) der Universität. Die Ratten wurden in Plastikkäfigen mit Sägemehleinstreu (dreimal pro Woche gewechselt) gehalten, etwa zu viert pro Käfig, und erhielten Futter (handelsübliches Futter für Nagetiere) und gefiltertes Wasser nach Belieben in einem Raum mit kontrollierter Temperatur und Luftfeuchtigkeit unter 12 °C. 12 h Dunkel-/Hell-Zyklus.

Die Ratten wurden zufällig in fünf Versuchsgruppen eingeteilt, bestehend aus acht Ratten (n = 8) pro Gruppe: Naiv (intakte Ratten; erhielten keine Injektion und kein PBMT); SCB (erhielt fünf Dosen des Vehikels, 0,1 M Natriumcitratpuffer und kein PBMT); STZ (erhielt fünf Dosen STZ, 25 mg/kg pro Dosis und kein PBMT); SCB + PBMT (erhielten fünf Dosen des Vehikels und wurden an PBMT weitergeleitet); STZ + PBMT (erhielt fünf Dosen STZ und wurde an PBMT weitergeleitet). Es wurden alle Anstrengungen unternommen, um die Anzahl der Ratten und ihr Leiden zu minimieren.

Die T1D-Induktion wurde gemäß früheren Studien unserer Gruppe66,71,72,73,74 durchgeführt und bestand aus einer niedrigen Dosis STZ (25 mg/kg) (N-[Methylnitrosocarbamoyl]-α-d-glucosamin; Sigma- Aldrich®, St. Louis, MO, USA]), im Vehikel verdünnt (0,1 M Natriumcitratpuffer, SCB [pH 4,5]) und einmal täglich an fünf aufeinanderfolgenden Tagen intraperitoneal (ip) injiziert (STZ und STZ + PBMT). Gruppen). Den Kontrolltieren (SCB- und SCB + PBMT-Gruppen) wurde täglich das gleiche Vehikelvolumen injiziert, das je nach Gewicht der Ratten zwischen 50 und 62,5 µl lag. Blutzuckermessungen aus der Schwanzvene wurden mit einem Accu-Chek® Sensor Comfort (Roche Diagnostics®, Deutschland) durchgeführt. Die Entwicklung einer Hyperglykämie und das Gewicht der Ratten wurden an den Tagen 0, 7, 14, 21, 24 und 28 nach Beginn der STZ- oder Vehikelinjektionen überwacht.

Die Hyperalgesie wurde anhand der mechanischen Entzugsschwellen gemessen, die durch Anwendung des elektronischen von Frey-Tests (Insight®, Ribeirão Preto, SP, Brasilien) bestimmt wurden. Wir verwendeten eine Polypropylen-Pipettenspitze, die an einen handgeführten Kraftaufnehmer mit halbmondförmigem Druck in der Plantarfläche der rechten und linken Hinterpfoten der Ratten angepasst war. Das Gerät wandelt den auf die Mittelsohlenfläche der Pfote ausgeübten Druck automatisch in Gramm-Kraft (g) um, sobald die Pfote zurückgezogen wird. Die Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in einzelne Kunststoffkäfige mit Metallgitterboden gesetzt und vor dem Test 30 Minuten lang akklimatisiert. Elektronische von Frey-Tests wurden bei allen Versuchsgruppen 0, 7, 14, 21, 24 und 28 Tage nach Beginn der STZ- oder Vehikelinjektionen, immer am Vormittag, von einem blinden Untersucher für die Gruppen und die Behandlung durchgeführt. Für die STZ + PBMT-Gruppe wurde 19 Tage nach Beginn der STZ-Injektionen eine zusätzliche Analyse durchgeführt, um nur hyperalgetische Ratten für die PBMT-Exposition auszuwählen.

Der CatWalk-Laufbahntest (Noldus Inc., Wageningen, Niederlande) besteht aus einem beleuchteten Gehweg-Glasboden mit einer Hochgeschwindigkeits-Videokamera (Gevicam GP-3360; GEViCAM Inc., Milpitas, CA, USA), die mit einem Weitwinkelobjektiv ausgestattet ist (6,0 mm; DF6HA-1B, Fujinon Corp., China). Die Kamera wurde unter dem Gehweg in einer Höhe von 56 cm positioniert und die Software CatWalk™ XT 10.6 zeichnete automatisch die Pfotenabdrücke auf, als das Tier den Gehweg in einer kalibrierten Spur von 20 × 10 cm Länge überquerte. Die grüne LED plus ein rot beleuchteter Hintergrund erzeugen im Glasboden einen Kontrast nach Tierschritten. CatWalk XT-Konfigurationen wurden gemäß den von Vieira et al.74 verwendeten Parametern eingerichtet. Für die aktuelle Studie haben wir den Durchschnitt zwischen den Hinterpfoten (rechte Hinterpfote [RH] und linke Hinterpfote [LH]) hinsichtlich der maximalen Kontaktfläche (cm2), der Druckfläche (cm2) und der Schrittlänge (cm) berücksichtigt wurden 0, 7, 14, 21, 24 und 28 Tage nach Beginn der STZ- oder Vehikelinjektionen analysiert, immer nachmittags bei ausgeschalteter Raumbeleuchtung. Jede Ratte führte in jedem Analysezeitraum drei Läufe durch, sodass pro Gruppe und Zeitraum 24 Läufe abgeschlossen wurden.

Ratten aus den Gruppen SCB + PBMT und STZ + PBMT wurden acht Tage lang (vom 21. bis zum 28. Tag nach STZ- oder Vehikelinjektionen) einmal täglich, immer morgens, PBMT unterzogen. Für die STZ + PBMT-Gruppe wurden nur hyperalgetische Ratten für die Laserbehandlung in Betracht gezogen, da in unserem DN-Modell etwa 20 % der Ratten, die STZ-Injektionen erhielten, nicht hyperalgetisch wurden (Daten nicht gezeigt). PBMT wurde mit einem Endophoton LLT1307 (KLD Biosistemas Equip. Elet. Ltda®, Amparo, SP, Brasilien) Klasse IIIB-Lasergerät durchgeführt. Die Ratten wurden mit Isofluran (3 %) (Cristália®, Itapira, SP, Brasilien) anästhesiert, und die Laserbestrahlung wurde beidseitig direkt auf die rasierte Haut auf dem Rücken der Ratte an einem einzigen Punkt zwischen L4-L5-Wirbelsäulenniveau angewendet. PBMT-Parameter sind in Tabelle 1 beschrieben.

Für die Analyse der Konzentrationen entzündlicher Zytokine und der MAPK-Genexpression wurden Ratten unter Isofluran (3 %) (Cristália®) anästhesiert und auf humane Weise eingeschläfert. Nach der Präparation wurden L4- und L5-DRG gesammelt, in flüssigem Stickstoff (–196,15 °C) eingefroren und zur späteren Homogenisierung bei –80 °C gelagert. Zu den DRG-Proben für ELISA-Immunoassays wurde RIPA-Lyse- und Extraktionspuffer (Thermo Scientific™, Waltham, MA, USA) hinzugefügt, der Natriumorthovanadat, Proteaseinhibitor und PMSF (Phenylmethansulfonylfluorid) (Thermo Scientific™) enthielt. Die Proben wurden in einen FastPrep®-Homogenisator (MP Biomedicals™, Santa Ana, CA, USA) gegeben und dann in 5-Minuten-Intervallen bei 4 °C (5 × 20 s) geschüttelt. Danach wurde das homogenisierte DRG 3 Stunden lang bei 4 °C kontinuierlich gerührt und dann 15 Minuten lang bei 4 °C und 12.000 U/min zentrifugiert. Der resultierende Überstand wurde in ein neues Röhrchen überführt. Die Proteinkonzentrationen wurden mit dem Bradford-Assay105 gemessen.

Für die MAPK-Genexpression durch Echtzeit-RT-qPCR wurden DRG fragmentiert und in TRIzol® (Invitrogen Life Technologies™, Carlsbad, CA, USA) (1 ml/mg) homogenisiert, um die Gesamt-RNA gemäß den Anweisungen des Herstellers zu isolieren. Dem Homogenat wurden 0,2 ml Chloroform (Sigma-Aldrich®) zugesetzt und nach 3-minütigem Ruhen bei Raumtemperatur wurde es 15 Minuten lang bei 4 °C und 12.000 U/min zentrifugiert. Die wässrige Phase wurde in ein neues Röhrchen überführt, in das 0,5 ml Isopropanol gegeben wurden. Nach einer erneuten Zentrifugation wurde das Pellet mit 75 % Ethanol gewaschen und die Gesamt-RNA in mit UltraPure™ DEPC behandeltem Wasser (Thermo Scientific™) resuspendiert. Die gesamte DRG-RNA wurde unter Verwendung eines Ultra-Low-Volume-Spektrophotometers (Epoch Microplate Spectrometer, BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, USA) quantifiziert.

Für die DRG-Immunfluoreszenz (IF) wurden Ratten mit Ketamin (85 mg/kg, ip) und Xylazin (10 mg/kg, ip) anästhesiert und dann durch Herzperfusion (durch die aufsteigende Aorta) mit Kochsalzlösung (0,9 % NaCl, 200 ml). Nach der Entblutung wurden die Ratten mit 4 % Paraformaldehyd (PFA, pH 7,4, 4 °C, 300 ml) perfundiert. Dann wurden L4- und L5-DRG gesammelt und über Nacht bei 4 °C in 4 % PFA nachfixiert, gefolgt von 48 Stunden in 30 % Saccharose bei 4 °C. Einzelne DRG wurden in Tissue-Tek® OCT-Compound (Sakura® Finetek, CA, USA) eingebettet und auf einem Kryostaten (Leica Biosystems, Wetzlar, Deutschland) unter Verwendung von gelatinierten Objektträgern nichtserielle 14-µm-Schnitte angefertigt.

Für IL-1β, TNF-α, IL-6 und CINC-1 wurden 96-Well-Platten mit dem DuoSet® ELISA-Kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) verwendet und die Ergebnisse wurden in Pikogramm pro Milliliter ausgedrückt (pg/ml). Für IL-10 wurden die Konzentrationen mit dem RayBio® Rat IL-10 ELISA-Kit (#ELR-IL10) (RayBiotech, Peachtree Corners, GA, USA) gemessen und die Ergebnisse in Pikogramm pro Milliliter pro Milligramm (pg/ ml/mg) Gewebe. Für beide ELISA-Kits wurden die Anweisungen des Herstellers befolgt. Die Absorption wurde bei 450 nm mit einem Asys UVM 340-Mikroplattenlesegerät (Biochrom Ltd., Cambridge, UK) bestimmt und die Ergebnisse durch Vergleich der optischen Dichte mit den Standardkurvendichten erhalten.

500 ng der aus L4- und L5-DRG extrahierten Gesamt-RNA wurden einer cDNA-Synthese (SuperScript™ VILO™ cDNA Synthesis Kit, Invitrogen Life Technologies™) gemäß dem Protokoll des Herstellers unterzogen. Spezifische Primer für die Gene p38, ERK1/2, JNK, Arfgef1 und Serpinb6 wurden mit dem Tool „Pick Primers“ entworfen, das auf NCBI/Primer-blast verfügbar ist (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/ Primer-Blast) und kommerziell synthetisiert. Die Amplikons wurden auf weniger als 200 Basenpaare eingestellt und Dimere, Kreuzdimere und Haarnadeln wurden während des Primerdesigns eliminiert (oder auf ein Minimum beschränkt). Die Primersequenzen sind in Tabelle 2 beschrieben. Die Annealing-Temperatur wurde auf 60 °C eingestellt und der GC-Gehalt (Guanin-Cytosin) betrug 50–55 %.

Die 2−ΔΔCt-Methode106 führte eine relative Genexpressionsanalyse im Vergleich zu einem internen Kontrollindex durch. Die Reaktionen wurden mit der StepOne Plus Real-Time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) unter Verwendung von SYBR Green als Fluoreszenzsignal (Power SYBR™ Green PCR Master Mix, Applied Biosystems, USA) und 1:10 von durchgeführt die erhaltene cDNA aus jeder Probe.

DRG-Schnitte wurden 30 Minuten in 0,1 M Glycin inkubiert, gefolgt von einer Blockierung mit 2 % Rinderserumalbumin (BSA) und einer Permeabilisierung in 0,2 % Triton X-100 für 1 Stunde bei Raumtemperatur. Für Anti-Phospho-p44/42 MAPK (ERK 1/2) und Anti-Phospho-SAPK/JNK wurde vor der 2 % BSA-Blockierung ein zusätzlicher Schritt durchgeführt, der aus einer 100 % Permeabilisierung von Methanol bei –20 °C bestand. Anschließend wurden die Schnitte in 0,1 M PBS plus 0,1 % Triton-100 und 1 % BSA über Nacht in einer feuchten Atmosphäre bei 4 °C mit den spezifischen Primärantikörpern inkubiert. Die folgenden Antikörper wurden verwendet: Anti-Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (D3F9) XP® Rabbit mAb (1:500); Anti-Phospho-p44/42 MAPK (ERK 1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP® Rabbit mAb (1:200); und Anti-Phospho-SAPK/JNK (Th183/Tyr185) (G9) Maus-mAb (1:400), alle von Cell Signaling Technology® (Danvers, MA, USA). Nach der Inkubationszeit wurden die Schnitte zweimal in derselben Inkubationslösung (ohne Antikörper) und dann fünfmal jeweils 5 Minuten lang in 0,1 M PBS gewaschen. Die Schnitte wurden dann mit den Sekundärantikörpern (Esel-Anti-Kaninchen- oder Anti-Maus-Alexa 488, 1:1000, #A21206, Thermo Scientific™), verdünnt in derselben Primärantikörperlösung, 1 Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert. Nach der Inkubation wurden die DRG-Schnitte fünfmal 5 Minuten lang mit 0,1 M PBS gewaschen.

Die Kerne wurden mit 4′,6-Diamidino-2-phenylindol-dihydrochlorid (DAPI, 0,25 µg/ml, D9542, Sigma-Aldrich®), verdünnt in 0,1 M PBS, 10 Minuten lang bei Raumtemperatur gefärbt und die Schnitte mit Vectashield® abgedeckt ( Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Negativkontrollen wurden ohne Inkubation in Primärantikörpern hergestellt, um eine unspezifische Bindung zu bestätigen. Die Objektträger wurden zunächst in einem invertierten Epifluoreszenzmikroskop Leica DMi6000 B untersucht, das mit einer DFC360 FX-Kamera und einer Leica-Fluoreszenzlichtquelle CTR7000HS (Leica Microsystems) gekoppelt war. Nach der Bestätigung der positiven Fluoreszenz wurden die endgültigen Bilder in einem konfokalen Laser-Scanning-Mikroskop Zeiss Axio Observer Z1 LSM780-NLO (Carl Zeiss AG, Oberkochen, Deutschland) mit Hilfe des EC Plan-Neofluar 20x/0,50 Dry und aufgenommen EC Plan-Neofluar 40×/1,30 Oil DIC Objektiv.

Die primäre Zellkultur von DRG-Neuronen wurde gemäß dem von Linhart et al.107 beschriebenen Protokoll durchgeführt und von unserer Forschungsgruppe gemäß der Veröffentlichung von Manzo et al.108 und do Prado et al.73 modifiziert. Es wurden gesunde männliche Lewis-Ratten (LEW/HsdUnib, Harlan, USA, 1996) mit einem Gewicht von etwa 200 g und einem Alter von 4 Wochen verwendet. Die Ratten wurden unter tiefer Anästhesie (3 % Isofluran; Cristália®) auf humane Weise eingeschläfert und anschließend enthauptet. Sechzehn bis zwanzig DRGs aus der Brust- und Lendenwirbelsäule wurden gesammelt und in Hank's Balanced Salt Solution (HBSS, enthaltend 10 mM HEPES) gegeben. Anschließend wurden die Zellen durch Inkubation mit HBSS, das 0,28 U/ml Kollagenase Typ II enthielt, für 60 Minuten bei 37 °C, gefolgt von 6 Minuten in 0,25 mg/ml Trypsin, dissoziiert. Zur Hemmung der Trypsinwirkung wurden die Zellen zweimal in DMEM gewaschen, ergänzt mit fötalem Rinderserum (FBS; 10 %), 50 U/ml Penicillin und 50 mg/ml Streptomycin. Mechanisch dissoziierte Zellen wurden auf mit Laminin und Poly-D-Lysin beschichteten Deckgläsern ausplattiert und bei 37 °C und 5 % CO2 gehalten. Alle Zellkulturmaterialien wurden von Sigma-Aldrich® gekauft, mit Ausnahme von FBS, das von Vitrocell Embriolife (Campinas, SP, Brasilien) gekauft wurde.

Nach Abschluss der 24-stündigen Inkubation unter normoglykämischem (5,5 mM Glucose) oder hyperglykämischem (55 mM Glucose) Zellmedium wurden sensorische DRG-Neuronen PBMT mit denselben in Tabelle 1 beschriebenen Parametern ausgesetzt, jedoch mit indirektem Kontakt durch die „Wischbewegung“. , wobei der Lasersondenausgang in einem Abstand von 1 cm vom Zellmedium gehalten wurde. Unmittelbar nach der Bestrahlung wurden DRG-kultivierte Neuronen in HBSS mit 10 µM FLUO-4, AM und 1 % PowerLoad (Thermo Scientific™) 40 Minuten lang, vor Licht geschützt, bei 37 °C und 5 % CO2 inkubiert. Deckgläser wurden in eine Perfusionskammer (Warner Instruments, Holliston, MA, USA) eingeführt und auf ein invertiertes Leica DMi6000 B-Mikroskop gelegt, das mit einer DFC360 FX-Kamera und einer Leica-Fluoreszenzlichtquelle CTR 7000 HS (480 nm Anregung, 527/30 nm) gekoppelt war Unterdrückungsfilter) (Leica Microsystems). Ein computergesteuertes Ventilsystem (Warner Instruments) wurde für die Zellperfusion mit unterschiedlichen KCl-Molaritäten [5 mM (basal), 15 mM (teilweise) und 50 mM (maximal)] verwendet und die Flussrate wurde auf 5 ml/eingestellt. min (vollständige Änderung des Kammervolumens alle 2 s)73.108. Bilder wurden mit einer Rate von einem Bild/s aufgenommen und die Werte der Fluoreszenzintensität (Δ[Ca2+]i) wurden mit ΔF/F0 normalisiert, wobei ΔF der endgültigen Fluoreszenz (F) minus der Grundfluoreszenz (F0) entspricht. Die Daten wurden auch als Prozentsatz der auf 15 mM KCl reagierenden Zellen in Bezug auf die Gesamtzahl der auf 50 mM KCl reagierenden Zellen in vier verschiedenen Situationen dargestellt: (i) wenn die Zellen in einem niedrigen Glucosegehalt inkubiert wurden; (ii) niedrige Glukose plus PBMT; (iii) hoher Glucosegehalt oder (iv) hoher Glucosegehalt plus PBMT.

Für Vergleiche zwischen Gruppen und Behandlungsdauer verwendeten wir eine Zwei-Wege-ANOVA, gefolgt von einem Bonferroni-Post-hoc-Test. Die einfaktorielle ANOVA führte weitere Vergleiche zwischen drei oder mehr Gruppen durch, gefolgt von einem Bonferroni-Post-hoc-Test. Für Vergleiche zwischen nur zwei Gruppen verwendeten wir einen ungepaarten Student-T-Test. p < 0,05 (*), p < 0,01 (**) und p < 0,001 (***) wurden als statistisch signifikant angesehen. Alle statistischen Tests wurden mit der GraphPad Prism®-Software, Versionen 5 und 7, durchgeführt. Numerische Werte wurden als Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwerts (SEM) ausgedrückt.

Die Daten, die die Ergebnisse dieser Studie stützen, sind auf Anfrage beim entsprechenden Autor [CAP] erhältlich.

Feldman, EL, Nave, K., Jensen, TS & Bennett, DLH Neue Horizonte in der diabetischen Neuropathie: Mechanismen, Bioenergetik und Schmerz. Neuron 93, 1296–1313 (2017).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Callaghan, BC, Cheng, HT, Stables, CL, Smith, AL & Feldman, EL Diabetische Neuropathie: Klinische Manifestationen und aktuelle Behandlungen. Lancet Neurol. 11, 521–534 (2012).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Jensen, TS & Finnerup, NB Allodynie und Hyperalgesie bei neuropathischen Schmerzen: Klinische Manifestationen und Mechanismen. Lancet Neurol. 13, 924–935 (2014).

Artikel PubMed Google Scholar

Truini, A., Garcia-Larrea, L. & Cruccu, G. Neubewertung neuropathischer Schmerzen beim Menschen – Wie Symptome dabei helfen, Mechanismen aufzudecken. Nat. Rev. Neurol. 9, 572–582 (2013).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Gandhi, RA & Selvarajah, D. Schmerzhafte diabetische Neuropathie verstehen und behandeln: Zeit für einen Paradigmenwechsel. Diabetes. Med. 32, 771–777 (2015).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Harris, K., Boland, C., Meade, L. & Battise, D. Zusatztherapie zur Glukosekontrolle bei Patienten mit Typ-1-Diabetes. Diabetes-Metabol. Syndr. Obes. 11, 159–173 (2018).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Yagihashi, S., Mizukami, H. & Sugimoto, K. Mechanismus der diabetischen Neuropathie: Wo stehen wir jetzt und wohin müssen wir gehen? J. Diabetes Investig. 2, 18–32 (2011).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Lee, AY & Chung, SS Beiträge des Polyolwegs zum oxidativen Stress bei diabetischem Katarakt. FASEB J. 13, 23–30 (1999).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Brownlee, M. Biochemie und molekulare Zellbiologie diabetischer Komplikationen. Natur 414, 813–820 (2001).

Artikel ADS CAS PubMed Google Scholar

Yan, L.-J. Pathogenese chronischer Hyperglykämie: Vom reduktiven Stress zum oxidativen Stress. J. Diabetes Res. 2014, 137919 (2014).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Schreiber, AK, Nones, CFM, Reis, RC, Chichorro, JG & Cunha, JM Diabetischer neuropathischer Schmerz: Physiopathologie und Behandlung. Welt J. Diabetes. 6, 432–444 (2015).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Thornalley, PJ Glykation bei diabetischer Neuropathie: Merkmale, Folgen, Ursachen und Therapiemöglichkeiten. Int. Rev. Neurobiol. 50, 37–57 (2002).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Juranek, J., Ray, R., Banach, M. & Rai, V. Rezeptor für fortgeschrittene Glykationsendprodukte bei neurodegenerativen Erkrankungen haben einen schlechten Ruf. Rev. Neurosci. 26, 691–698 (2015).

Artikel PubMed Google Scholar

Greene, DA, Stevens, MJ, Obrosova, I. & Feldman, EL Glukoseinduzierter oxidativer Stress und programmierter Zelltod bei diabetischer Neuropathie. EUR. J. Pharmacol. 375, 217–223 (1999).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Pop-Busui, R., Sima, A. & Stevens, M. Diabetische Neuropathie und oxidativer Stress. Diabetes-Metabol. Res. Rev. 22, 257–273 (2006).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Ishii, DN & Lupien, SB Insulinähnliche Wachstumsfaktoren schützen vor diabetischer Neuropathie: Auswirkungen auf die Regeneration sensorischer Nerven bei Ratten. J. Neurosci. Res. 40, 138–144 (1995).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Fernyhough, P. & Calcutt, NA Abnormale Kalziumhomöostase bei peripheren Neuropathien. Cell Calcium 47, 130–139 (2010).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Koya, D. et al. Charakterisierung der Beta-Isoformaktivierung der Proteinkinase C auf die Genexpression des transformierenden Wachstumsfaktors Beta, extrazellulärer Matrixkomponenten und Prostanoiden in den Glomeruli diabetischer Ratten. J. Clin. Investig. 100, 115–126 (1997).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Akude, E. et al. Eine verminderte Superoxidbildung ist mit einer Funktionsstörung der Atmungskette und Veränderungen im mitochondrialen Proteom sensorischer Neuronen diabetischer Ratten verbunden. Diabetes 60, 288–297 (2011).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Chowdhury, SKR et al. Funktionsstörung der mitochondrialen Atmungskette in Spinalganglien von Ratten mit Streptozotocin-induziertem Diabetes und deren Korrektur durch Insulinbehandlung. Diabetes 59, 1082–1091 (2010).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Younger, DS, Rosoklija, G., Hays, AP, Trojaborg, W. & Latov, N. Diabetische periphere Neuropathie: Eine klinisch-pathologische und immunhistochemische Analyse von Suralnervenbiopsien. Muskelnerv. 19, 722–727 (1996).

3.0.CO;2-C" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F%28SICI%291097-4598%28199606%2919%3A6%3C722%3A%3AAID-MUS6%3E3.0.CO%3B2-C" aria-label="Article reference 21" data-doi="10.1002/(SICI)1097-4598(199606)19:63.0.CO;2-C">Artikel CAS PubMed Google Scholar

Tomlinson, DR & Gardiner, NJ Diabetische Neuropathien: Komponenten der Ätiologie. J. Peripherie. Nerv. Syst. 13, 112–121 (2008).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Satoh, J., Yagihashi, S. & Toyota, T. Die mögliche Rolle des Tumornekrosefaktors-α bei diabetischer Polyneuropathie. Exp. Diabesity Res. 4, 65–71 (2003).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Yamagishi, S.-I. et al. Korrektur der Proteinkinase-C-Aktivität und der Makrophagenmigration im peripheren Nerv durch Pioglitazon, einen Peroxisomen-Proliferator-aktivierten Gamma-Liganden, bei Ratten mit Insulinmangel und Diabetes. J. Neurochem. 104, 491–499 (2008).

CAS PubMed Google Scholar

Du, Y. et al. Auswirkungen der p38-MAPK-Hemmung auf frühe Stadien der diabetischen Retinopathie und die sensorische Nervenfunktion. Investig. Ophthalmol. Vis. Wissenschaft. 51, 2158–2164 (2010).

Artikel Google Scholar

Seger, R. & Krebs, EG Die MAPK-Signalkaskade. FASEB J. 9, 726–735 (1995).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Lewis, TS, Shapiro, PS & Ahn, NG Signaltransduktion durch MAP-Kinase-Kaskaden. Adv. Krebs Res. 74, 49–139 (1993).

Artikel Google Scholar

Widmann, C., Gibson, S., Jarpe, MB & Johnson, GL Mitogen-aktivierte Proteinkinase: Konservierung eines Drei-Kinase-Moduls von der Hefe zum Menschen. Physiol. Rev. 79, 143–180 (1999).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Obata, K. & Noguchi, K. MAPK-Aktivierung in nozizeptiven Neuronen und Schmerzüberempfindlichkeit. Lebenswissenschaft. 74, 2643–2653 (2004).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Johnson, GL & Lapadat, R. Mitogen-aktivierte Proteinkinasewege, vermittelt durch ERK-, JNK- und p38-Proteinkinasen. Science 298, 1911–1912 (2002).

Artikel ADS CAS PubMed Google Scholar

Krishna, M. & Narang, H. Die Komplexität mitogenaktivierter Proteinkinasen (MAPKs) leicht gemacht. Zellmol. Lebenswissenschaft. 65, 3525–3544 (2008).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Yang, S.-H., Sharrocks, AD & Whitmarsh, AJ Transkriptionsregulation durch die MAP-Kinase-Signalkaskaden. Gene 320, 3–21 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Bonny, C., Borsello, T. & Zine, A. Ausrichtung auf den JNK-Signalweg als therapeutische Schutzstrategie für Erkrankungen des Nervensystems. Rev. Neurosci. 67, 57–67 (2005).

Google Scholar

Tsuda, M., Ueno, H., Kataoka, A., Tozaki-Saitoh, H. & Inoue, K. Die Aktivierung von Mikroglia im Hinterhorn trägt über extrazelluläre signalregulierte Proteinkinase-Signalisierung zur Diabetes-induzierten taktilen Allodynie bei. Glia 56, 378–386 (2008).

Artikel PubMed Google Scholar

Wodarski, R., Clark, AK, Grist, J., Marchand, F. & Malcangio, M. Gabapentin kehrt die Mikroglia-Aktivierung im Rückenmark von Streptozotocin-induzierten diabetischen Ratten um. EUR. J. Pain 13, 807–811 (2009).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Manning, AM & Davis, RJ JNK mit therapeutischem Nutzen ins Visier nehmen: Vom Schrott zum Gold?. Nat. Rev. Drug Discov. 2, 554–565 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Agell, N., Bachs, O., Rocamora, N. & Villalonga, P. Modulation des Ras/Raf/MEK/ERK-Signalwegs durch Ca(2+) und Calmodulin. Zellsignal. 4, 649–654 (2002).

Artikel Google Scholar

White, CD & Sacks, DB Regulierung der MAP-Kinase-Signalübertragung durch Kalzium. Methoden Mol. Biol. 661, 151–165 (2010).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Rosen, LB, Ginty, DD, Weber, MJ & Greenberg, ME Membrandepolarisation und Kalziumeinstrom stimulieren MEK- und MAP-Kinase über die Aktivierung von Ras. Neuron 12, 1207–1221 (1994).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Purves, T. et al. Eine Rolle für Mitogen-aktivierte Proteinkinasen in der Ätiologie der diabetischen Neuropathie. FASEB J. 15, 2508–2514 (2001).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Price, SA, Agthong, S., Middlemas, AB & Tomlinson, DR Mitogen-aktivierte Proteinkinase p38 vermittelt eine verringerte Nervenleitungsgeschwindigkeit bei experimenteller diabetischer Neuropathie: Wechselwirkungen mit Aldosereduktase. Diabetes 53, 1851–1856 (2004).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Tsuda, M., Mizokoshi, A., Shigemoto-Mogami, Y., Koizumi, S. & Inoue, K. Die Aktivierung der p38-Mitogen-aktivierten Proteinkinase in spinalen hyperaktiven Mikroglia trägt zur Schmerzüberempfindlichkeit nach einer peripheren Nervenverletzung bei. Glia 45, 89–95 (2004).

Artikel PubMed Google Scholar

Daulhac, L. et al. Diabetes-induzierte mechanische Hyperalgesie beinhaltet die Aktivierung der spinalen Mitogen-aktivierten Proteinkinase in Neuronen und Mikroglia über N-Methyl-d-Aspartat-abhängige Mechanismen. Mol. Pharmakol. 70, 1246–1254 (2006).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Piao, ZG et al. Die Aktivierung von Glia und mikroglialem p38 MAPK im medullären Hinterhorn trägt zur taktilen Überempfindlichkeit nach einer Verletzung des sensorischen Nervs des Trigeminus bei. Schmerz 121, 219–231 (2006).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Xu, J.-T. et al. Die Aktivierung von p38 in unverletzten primären afferenten Neuronen und in spinalen Mikroglia trägt zur Entwicklung neuropathischer Schmerzen bei, die durch eine selektive motorische Faserverletzung hervorgerufen werden. Exp. Neurol. 204, 355–365 (2007).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Cheng, H.-L. & Feldman, EL Bidirektionale Regulierung der p38-Kinase und der N-terminalen c-Jun-Proteinkinase durch den insulinähnlichen Wachstumsfaktor-IJ Biol. Chem. 273, 14560–14565 (1998).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Cheng, C. & Zochodne, DW Sensorische Neuronen mit aktivierter Caspase-3 überleben experimentellen Langzeitdiabetes. Diabetes 52, 2363–2371 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Vincent, AM, McLean, LL, Backus, C. & Feldman, EL Kurzfristige Hyperglykämie führt zu oxidativen Schäden und Apoptose in Neuronen. FASEB J. 19, 638–640 (2005).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Senning, EN & Gordon, SE Aktivität und Ca2+ regulieren die Mobilität von TRPV1-Kanälen in der Plasmamembran sensorischer Neuronen. Elife 4, e03819 (2015).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Way, KJ, Katai, N. & King, GL Proteinkinase C und die Entwicklung diabetischer Gefäßkomplikationen. Diabetes. Med. 18, 945–959 (2001).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Pabbidi, RM et al. Einfluss von TRPV1 auf diabetesbedingte Veränderungen der thermischen Schmerzempfindlichkeit. Mol. Schmerz. 4, 1–17 (2008).

Artikel Google Scholar

Holanda, VM, Chavantes, MC, Wu, X. & Anders, JJ Die mechanistische Grundlage für die Photobiomodulationstherapie neuropathischer Schmerzen durch Laserlicht im nahen Infrarot. Laserchirurgie. Med. 49, 516–524 (2017).

PubMed Google Scholar

Passarella, S. & Karu, T. Die Absorption monochromatischer und schmalbandiger Strahlung im sichtbaren und nahen IR sowohl durch mitochondriale als auch nicht-mitochondriale Photoakzeptoren führt zu Photobiomodulation. J. Photochem. Photobiol. B. 140, 344–358 (2014).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Tsai, S.-R. & Hamblin, MR Biologische Wirkungen und medizinische Anwendungen von Infrarotstrahlung. J. Photochem. Photobiol. B. 170, 197–207 (2017).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Anders, JJ, Lanzafame, RJ & Arany, PR Low-Level-Licht-/Lasertherapie versus Photobiomodulationstherapie. Fotomed. Laserchirurgie. 33, 183–184 (2015).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Chung, H. et al. Das A und O der Low-Level-Laser-(Licht-)Therapie. Ann. Biomed. Ing. 40, 516–533 (2012).

Artikel PubMed Google Scholar

Hamblin, MR-Mechanismen und mitochondriale Redoxsignale bei der Photobiomodulation. Photochem. Photobiol. 94, 199–212 (2018).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Alcântara, CC et al. Wirkung der Low-Level-Lasertherapie (LLLT) auf die akute neurale Erholung und die entzündungsbedingte Genexpression nach einer Quetschverletzung im Ischiasnerv der Ratte. Laserchirurgie. Med. 45, 246–252 (2013).

Artikel PubMed Google Scholar

Chow, RT, Johnson, MI, Lopes-Martins, RAB & Bjordal, JM Wirksamkeit der Low-Level-Lasertherapie bei der Behandlung von Nackenschmerzen: Eine systematische Überprüfung und Metaanalyse randomisierter, placebo- oder aktivbehandlungskontrollierter Studien. Lancet 374, 1897–1908 (2009).

Artikel PubMed Google Scholar

Vieira, WF, Kenzo-Kagawa, B., Cogo, JC, Baranauskas, V. & da Cruz-Höfling, MA Low-Level-Lasertherapie (904 nm) wirkt motorischem Defizit der Hinterbeine von Mäusen nach einer durch Schlangenbiss verursachten Skelettmuskelverletzung entgegen. Nachahmung einer intramuskulären Giftinjektion. PLoS ONE 11, e0158980 (2016).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Vieira, WF et al. Schwingungsspektroskopie von Muskelgewebe, das durch Schlangengift vergiftet und einer Photobiomodulationstherapie ausgesetzt wurde. Laser Med. Wissenschaft. 33, 503–512 (2017).

Artikel PubMed Google Scholar

Bjordal, JM, Couppé, C., Chow, RT, Tunér, J. & Ljunggren, EA Eine systematische Übersicht über Low-Level-Lasertherapie mit ortsspezifischen Dosen bei Schmerzen aufgrund chronischer Gelenkerkrankungen. Aust. J. Physiother. 49, 107–116 (2003).

Artikel PubMed Google Scholar

Gigo-Benato, D. et al. Auswirkungen einer 660- und 780-nm-Low-Level-Lasertherapie auf die neuromuskuläre Erholung nach einer Quetschverletzung im Ischiasnerv der Ratte. Laserchirurgie. Med. 42, 673–682 (2010).

Artikel PubMed Google Scholar

Posten, W. et al. Low-Level-Lasertherapie zur Wundheilung: Mechanismus und Wirksamkeit. Dermatol. Surg. 31, 334–340 (2005).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Vieira, WF et al. Erforschung der Fähigkeit einer Low-Level-Laserbestrahlung, Myonekrose zu reduzieren und die Myogenin-Transkription nach einer Vergiftung durch Bothrops jararacussu zu erhöhen. Photochem. Photobiol. Wissenschaft. 20, 571–583 (2021).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Vieira, WF, de Magalhães, SF, Farias, FH, de Thomaz, AA & Parada, CA Raman-Spektroskopie von Spinalganglien von Streptozotocin-induzierten diabetischen neuropathischen Ratten, die einer Photobiomodulationstherapie unterzogen wurden. J. Biophotonik. 12, 1–14 (2019).

Artikel Google Scholar

Szkudelski, T. Der Mechanismus der Alloxan- und Streptozotocin-Wirkung in B-Zellen der Bauchspeicheldrüse der Ratte. Physiol. Res. 50, 537–546 (2001).

CAS PubMed Google Scholar

Wang, Z. & Gleichmann, H. Glucose-Transporter-2-Expression: Verhinderung der Streptozotocin-induzierten Reduktion in Betazellen mit 5-Thio-d-Glucose. Exp. Klin. Endokrinol. Diabetes. 103, 83–97 (1995).

Artikel PubMed Google Scholar

Wang, Z. & Gleichmann, H. GLUT2 in Pankreasinseln: Entscheidendes Zielmolekül bei Diabetes, der durch mehrere niedrige Dosen Streptozotocin bei Mäusen induziert wird. Diabetes 47, 50–56 (1998).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Furman, BL Streptozotocin-induzierte diabetische Modelle bei Mäusen und Ratten. Curr. Protokoll. Pharmakol. 70, 5.47.1-5.47.20 (2015).

Artikel Google Scholar

Athie, MCP et al. Die Transkriptomanalyse der diabetischen Neuropathie der Spinalganglien deckt Mechanismen auf, die an Schmerzen und Regeneration beteiligt sind. Lebenswissenschaft. 205, 54–62 (2018).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Teixeira, JM et al. Diabetes-induzierte neuropathische mechanische Hyperalgesie hängt von der Aktivierung des P2X4-Rezeptors in den Spinalganglien ab. Neurowissenschaften 398, 158–170 (2019).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

do Prado, FC et al. Die Geschwindigkeit des Einsetzens der Hyperglykämie ist wichtig für die Entwicklung einer neuropathischen Hyperalgesie bei Streptozotocin-induzierten diabetischen Ratten. EUR. J. Neurosci. 52, 3642–3651 (2020).

Artikel PubMed Google Scholar

Vieira, WF et al. Die Ganganalyse korreliert mit mechanischer Hyperalgesie in einem Modell der Streptozotocin-induzierten diabetischen Neuropathie: Eine CatWalk-Studie zur dynamischen motorischen Funktion. Neurosci. Lette. 736, 135253 (2020).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Peplow, PV, Chung, T.-Y. & Baxter, GD Die Laserphotostimulation (660 nm) der Wundheilung bei diabetischen Mäusen wird nicht durch eine Verbesserung des Diabetes hervorgerufen. Laserchirurgie. Med. 44, 26–29 (2012).

Artikel PubMed Google Scholar

Chow, RT & Barnsley, L. Systematische Überprüfung der Literatur zur Low-Level-Lasertherapie (LLLT) bei der Behandlung von Nackenschmerzen. Laserchirurgie. Med. 37, 46–52 (2005).

Artikel PubMed Google Scholar

Byrnes, KR et al. Licht fördert die Regeneration und funktionelle Erholung und verändert die Immunantwort nach einer Rückenmarksverletzung. Laserchirurgie. Med. 36, 171–185 (2005).

Artikel PubMed Google Scholar

Snyder-Mackler, L. & Bork, CE Wirkung der Helium-Neon-Laserbestrahlung auf die Latenz peripherer sensorischer Nerven. Physik. Dort. 68, 223–225 (1988).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Maeda, T. Morphologische Demonstration der therapeutischen Schmerzdämpfungswirkung des Gallium-Aluminium-Arsenid-Diodenlasers mit niedrigem reaktivem Laser. Laser Ther. 1, 23–26 (1989).

Artikel Google Scholar

Holanda, VM et al. Photobiomodulation des Spinalganglions zur Behandlung von Schmerzen im unteren Rückenbereich: Eine Pilotstudie. Laserchirurgie. Med. 48, 653–659 (2016).

Artikel PubMed Google Scholar

Zochodne, DW, Ramji, N. & Toth, C. Neuronales Targeting bei Diabetes mellitus: Eine Geschichte von sensorischen Neuronen und Motoneuronen. Neurowissenschaftler. 14, 311–318 (2008).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Kambiz, S. et al. Ein Frühdiagnoseinstrument für diabetische periphere Neuropathie bei Ratten. PLoS ONE 10, e0126892 (2015).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Schwartz, AV et al. Diabetesbedingte Komplikationen, Blutzuckerkontrolle und Stürze bei älteren Erwachsenen. Diabetes Care 31, 391–396 (2008).

Artikel PubMed Google Scholar

Benitez, SU, Carneiro, EM & Oliveira, ALR Synaptische Eingabeänderungen an Motoneuronen des Rückenmarks korrelieren mit Beeinträchtigungen der motorischen Kontrolle in einem Typ-1-Diabetes-mellitus-Modell. Gehirnverhalten. 5, e00372 (2015).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Edwards, JL, Vincent, A., Cheng, T. & Feldman, EL Diabetische Neuropathie: Mechanismen zur Behandlung. Pharmakol. Dort. 120, 1–34 (2008).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Hsieh, Y.-L. et al. Low-Level-Lasertherapie lindert neuropathische Schmerzen und fördert die Wiederherstellung der Funktion bei Ratten mit chronischer Verengungsverletzung: Mögliche Beteiligung am Hypoxie-induzierbaren Faktor 1α (HIF-1α). J. Comp. Neurol. 520, 2903–2916 (2012).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Cidral-Filho, FJ et al. Die Therapie mit Leuchtdioden induziert Analgesie und senkt die Tumornekrosefaktor-α-Spiegel im Rückenmark und im Ischiasnerv nach Quetschung des Ischiasnervs bei Mäusen. EUR. J. Schmerz. 17, 1193–1204 (2013).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Albertini, R. et al. Entzündungshemmende Wirkung der Low-Level-Lasertherapie (LLLT) mit zwei verschiedenen roten Wellenlängen (660 nm und 684 nm) bei Carrageenan-induzierten Rattenpfotenödemen. J. Photochem. Photobiol. B. 89, 50–55 (2007).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Kholodenko, BN MAP-Kinase-Kaskadensignalisierung und endozytischer Handel: Eine Vernunftehe?. Trends Zellbiol. 12, 173–177 (2002).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Plotnikov, A., Zehorai, E., Procaccia, S. & Seger, R. Die MAPK-Kaskaden: Signalkomponenten, nukleare Rollen und Mechanismen der nuklearen Translokation. Biochim. Biophys. Acta. 1813, 1619–1633 (2011).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Pepper, G. & Easter, J. Kanonische und alternative MAPK-Signalisierung. Zellzyklus 6, 2628–2632.

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Tomlinson, DR Mitogen-aktivierte Proteinkinasen als Glukosewandler für diabetische Komplikationen. Diabetologia 42, 1271–1281 (1999).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Ciruela, A. et al. Identifizierung von MEK1 als neues Ziel für die Behandlung neuropathischer Schmerzen. Br. J. Pharmacol. 138, 751–756 (2003).

Artikel CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Galan, A., Cervero, F. & Laird, JMA Extrazelluläre signalregulierte Kinase-1 und -2 (ERK 1/2) vermitteln übertragene Hyperalgesie in einem Mausmodell viszeraler Schmerzen. Gehirnres. Mol. Gehirnres. 116, 126–134 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Kumar, S., Boehm, J. & Lee, JC p38-MAP-Kinasen: Schlüsselsignalmoleküle als therapeutische Ziele für entzündliche Erkrankungen. Nat. Rev. Drug Discov. 2, 717–726 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Boyle, DL et al. Regulierung peripherer Entzündungen durch spinale p38-MAP-Kinase bei Ratten. PLoS Med. 3, e338 (2006).

Artikel PubMed PubMed Central Google Scholar

Verri, WA Jr. et al. Hypernozizeptive Rolle von Zytokinen und Chemokinen: Ziele für die Entwicklung analgetischer Arzneimittel? Pharmakol. Dort. 112, 116–138 (2006).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Shefer, G., Oron, U., Irintchev, A., Wernig, A. & Halevy, O. Aktivierung von Skelettmuskelzellen durch Niedrigenergie-Laserbestrahlung: Eine Rolle für den MAPK/ERK-Signalweg. J. Cell Physiol. 187, 73–80 (2001).

3.0.CO;2-9" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F1097-4652%282001%299999%3A9999%3C%3A%3AAID-JCP1053%3E3.0.CO%3B2-9" aria-label="Article reference 98" data-doi="10.1002/1097-4652(2001)9999:99993.0.CO;2-9">Artikel CAS PubMed Google Scholar

Aleksic, V. et al. Niedrige Er:YAG-Laserbestrahlung steigert die Osteoblastenproliferation durch Aktivierung von MAPK/ERK. Laser Med. Wissenschaft. 25, 559–569 (2010).

Artikel PubMed Google Scholar

Ji, R.-R. & Suter, MR p38 MAPK, mikrogliale Signalübertragung und neuropathischer Schmerz. Mol. Schmerz. 3, 1–9 (2007).

Artikel Google Scholar

Zhai, K., Liskova, A., Kubatka, P. & Büsselberg, D. Kalziumeintrag durch TRPV1: Ein potenzielles Ziel für die Regulierung von Proliferation und Apoptose in Krebs- und gesunden Zellen. Int. J. Mol. Wissenschaft. 21, 4177 (2020).

Artikel CAS PubMed Central Google Scholar

Story, GM et al. ANKTM1, ein TRP-ähnlicher Kanal, der in nozizeptiven Neuronen exprimiert wird, wird durch kalte Temperaturen aktiviert. Zelle 112, 819–829 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Lee, YM et al. Eine neuartige Rolle des TRPV1-Kanals bei der UV-induzierten Matrix-Metalloproteinase (MMP)-1-Expression in HaCaT-Zellen. J. Cell Physiol. 219, 766–775 (2009).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Wang, Y., Huang, Y.-Y., Wang, Y., Lyu, P. & Hamblin, MR Die Photobiomodulation menschlicher Fettstammzellen mit 810-nm- und 980-nm-Lasern funktioniert über unterschiedliche Wirkmechanismen. Biochim. Biophys. Acta Gen. Subj. 1861, 441–449 (2017).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Bradford, MM Eine schnelle und empfindliche Methode zur Quantifizierung von Proteinmengen im Mikrogrammbereich unter Verwendung des Prinzips der Protein-Farbstoff-Bindung. Anal. Biochem. 72, 248–254 (1976).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Vandesompele, J. et al. Genaue Normalisierung quantitativer Echtzeit-RT-PCR-Daten durch geometrische Mittelung mehrerer interner Kontrollgene. Genombiol. 3, 1–12 (2002).

Artikel Google Scholar

Linhart, O., Obreja, O. & Kress, M. Die Entzündungsmediatoren Serotonin, Prostaglandin E2 und Bradykinin rufen einen Kalziumeinstrom in sensorischen Neuronen von Ratten hervor. Neurowissenschaften 118, 69–74 (2003).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Manzo, LP et al. Magnetisches, aber nicht nichtmagnetisches, reduziertes Graphenoxid im Rückenmark erhöht die nozizeptive neuronale Reaktionsfähigkeit. Nanomedizin 13, 1841–1851 (2017).

Artikel CAS PubMed Google Scholar

Referenzen herunterladen

Diese Studie wurde von der São Paulo Research Foundation (FAPESP) (Zuschüsse 2014/25153-7; 2015/12673-5; 2018/05108-8) und von Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel (CAPES) finanziert. Wir möchten dem National Institute of Science and Photonics Technology Applied to Cellular Biology (INFABiC; Campinas, Brasilien) für die Unterstützung bei der Bilderfassung danken; Wir danken auch César Eduardo Bissoto für die technische Unterstützung.

Abteilung für Struktur- und Funktionsbiologie, Institut für Biologie, Universität Campinas (UNICAMP), Carl von Linnaeus n/n, Cidade Universitária Zeferino Vaz, Campinas, SP, 13083-864, Brasilien

Willians Fernando Vieira, Kauê Franco Malange, Silviane Fernandes de Magalhães, Júlia Borges Paes Lemes, Gilson Gonçalves dos Santos, Catarine Massucato Nishijima, Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira, Maria Alice da Cruz-Höfling, Cláudia Herrera Tambeli und Carlos Amilcar Parada

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WFV und CAP haben die Studie entworfen; WFV, KFM, SFM, JBPL, GGS und CMN führten die Experimente durch; WFV, ALRO, MACH, CHT und CAP haben das Manuskript verfasst. Alle Autoren haben das Manuskript kritisch geprüft und zur Einreichung freigegeben.

Korrespondenz mit Carlos Amilcar Parada.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

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Vieira, WF, Malange, KF, de Magalhães, SF et al. Antihyperalgetische Wirkungen der Photobiomodulationstherapie (904 nm) auf Streptozotocin-induzierte diabetische Neuropathie implizieren den MAPK-Signalweg und die Modulation der Kalziumdynamik. Sci Rep 12, 16730 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-19947-2

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Eingegangen: 30. April 2022

Angenommen: 06. September 2022

Veröffentlicht: 06. Oktober 2022

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-19947-2

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